محلول بیوره – 250 سی سی

هدف آزمایش:

جهت تشخیص وجود پروتئین در نمونه (وجود پینود های پپتیدی در اسید آمینه ها )

وسایل مورد نیاز:آلبومین1%.ایزولوسین خالص.معرف بیوره.لوله آزمایش.پیپت.محلول سولفات مس.آب مقطر.محلول سود.سولفات مس.محلول پروتئین استاندارد. دستگاه بن ماری

روش اول :

در یک لوله آزمایش به مقدار2 سی سی آلبومین 1% ریخته و در لوله دیگر به مقدار 2 سی سی ایزولوسین خالص را می ریزیم  سپس به هر کدام از لوله ها به مقدار 2 سی سی معرف بیوره را اضافه کرده سپس محلول مخلوط کرده که مشاهده می کنیم لوله ی آلبومین دار به رنگ بنفش تیره درامده ولی لوله دیگر به رنگ آبی کم رنگ درامده.

روش دوم :

ابتدا در سه لوله آزمایش که در یکی 3سی سی پروتئین و در دیگری3 سی سی محلول قندی و در دیگری 3 سی سی محلول یک اسیدامینه را اضافه میکنیم سپس 2 سی سی سود 10-15% اضافه کرده و سپس لوله ها را بهم زده و در نهایت به هر کدام از لوله ها 1 سی سی سولفات مس می افزاییم(این کار را آهسته و با احتیاط انجام داده تا منجر به واکنش تحریکی نشود) و طوری که با ماده ی اولیه مخلوط نشود تا بشود حضور حلقه بنفش رنگ راکه نتیجه وجود پروتئین باشد را بین دو سطح به وجود آمده اثبات کنیم بعد از این کار با تکان دادن لوله کل لوله آزمایش بنفش رنگ می شود .

تئوری آزمایش :

از این آزمایش برای تشخیص وجود پروتئین در محلولاستفاده می شود.به طور کلی از آنجایی که پروتئین ها هم گروه آمین و هم گروه کربوکسیلشان اکثرا درگیر پیوند است، نمی توان از آزمایش های آمینو اسیدی برای تشخیصشان استفاده کرد.درصورتی که رنگ مایل به بنفش ایجاد شود نشان از وجود پروتئین و مثبت بودن آزمایش است.

اساس کار :

اساس روش بیوره این است که یون مس دو ظرفیتی (cu2) در محیط قلیایی با عامل آمین پیوند های پپتیدی، کمپلکس آبی رنگی ایجاد میکند که در طول موج 540nmجذب دارد. به دلیل اینکه مولکول بیوره نیز همین کمپلکس آبی را باcu2 تشکیل می دهد، این آزمایش بیوره نام دارد

نتیجه آزمایش :درست شدن حلقه ی بنفش رنگ بین دو فاز بیانگرو نشان دهنده ی وجود یون مس در بیوندهای ببتیدی است و وجود حداقل دو بیوند ببتیدی را در محلول مد نظر ازمایش را به اثبات رساند و هر چه تعداد پیوند ها پپتیدی بیشتر باشد —>شدت و غلظت رنگ بنفش بیشتر خواهد بود

http://dvm.loxblog.com/tag/%20%D8%A8%DB%8C%D9%88%D8%B1%D9%87%20/profile.php